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技術文章 / article
A375SM細胞收到貨的處理方法
2017-03-16 瀏覽次數：1756
有經驗和剛剛從事細胞培養(yǎng)工作的人員都應該認真仔細地詢問下細胞提供方提供的建議，提前了解所要培養(yǎng)細胞的詳細資料，準備好細胞所要用到的培養(yǎng)基和相關試劑，雖然所有的貼壁，半貼壁或者懸浮細胞處理方式差不多，但是不同的實驗室培養(yǎng)條件和處理力度還有試劑的批間差這些問題存在，也會導致對細胞處理不當，或者環(huán)境的不適應而造成細胞的死亡。
1.收到細胞，*時間要鏡檢：觀察細胞形態(tài)是否正常，對于貼壁細胞則要注意看貼壁情況是否很好 ，觀察細胞密度，有疑議及時咨提供細胞的技術人員。 由于運輸的時間或者溫度的變化，很多貼壁細胞在盛滿培養(yǎng)基的瓶子里生長的狀態(tài)和平時會有點不一樣，主要是貼壁牢固問題。比如293T，平時貼壁就不是很牢，在裝滿的培養(yǎng)基瓶子里面，會發(fā)生大片的脫落，細胞聚集在一起，但是細胞生長還是正常的，通過離心收集，加以胰酶的消化，重新打散，又可以正常的貼壁生長。
2.當通過上一步的觀察，細胞初步沒有任何問題時，進行下一步操作。當收到的細胞密達到80%左右時，則處理如下：棄除瓶中大部分培養(yǎng)基，僅保留5到10mL培養(yǎng)所需的常規(guī)培養(yǎng)基；或更換新鮮的培養(yǎng)基，置于培養(yǎng)箱中，隨后每天觀察。 細胞在低于正常生長溫度情況下，會調整為靜止期，或者慢速生長期，必須恢復37度的環(huán)境至少3個小時左右，才能重新調整到接近對數生長期的狀態(tài)，在對數生長期進行細胞的傳代會大大增加傳代的成功率，和細胞的存活率。
3.如果經*步觀察發(fā)現細胞密度超過90%，并且細胞狀態(tài)很好時，則復溫后2個小時需要立即傳代。傳代的比例應依據不同的細胞而定。對于生長比較快，狀態(tài)穩(wěn)定，不易受外界影響的細胞可以一次多傳幾瓶；對于生長較慢，細胞比較薄，狀態(tài)容易波動的細胞類型，一次少傳些，保證每瓶細胞密度大些，便于穩(wěn)定生長。至于一些比較陌生的細胞，*次處理也可以依照第二種情況。
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