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常見的提取外泌體方法

2018-05-17 瀏覽次數:6096

幾種常見的提取外泌體方法

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外泌體是大小30-200nm的膜性小囊泡,在血液、尿液、羊水、惡性腫瘤、腹水等體液及細胞培養上清中均存在。外泌體攜帶大量特異性的蛋白質和功能性的RNA等生物活性分子,和體內多種疾病的發生和發展密切相關。因外泌體攜帶重要的生物信息,使它具有很重要的潛在應用價值,一方面外泌體可以作為疾病的診斷標志物,另一方面外泌體可以作為一種治療手段,未來有望通過外泌體載藥用于疾病的治療。正因如此,外泌體的研究持續高熱度。

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外泌體研究的首要任務是對外泌體進行提取純化,提取外泌體的方法很多,那哪種方法提取外泌體*呢?

一、超速離心方法

原理:基于不同顆粒密度、沉降系數不同,利用低速離心和高速離心交替進行的方法分離外泌體顆粒。

優點:文獻引用較多,如實驗室設備條件滿足,可省成本

缺點:需要大型離心機,高離心力會損傷外泌體;操作耗時;步驟繁瑣;產量不穩定(受轉子、轉速、起始樣本量等多因素影響);起始樣本量需求高

二、密度梯度離心

原理:在超速離心力的作用下,使氯化銫或蔗糖等介質形成密度階層,通過密度梯度離心,讓外泌體沉降在某一個密度范圍。

優點:純度相對較高

缺點:操作非常復雜且耗時,需要大型離心機

三、免疫磁珠法

表面包被標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后,特異性識別外泌體特異性標志物(CD9、CD81、CD63等)。

優點:操作簡單、純度較高

缺點:成本高;產量少,只能收集一類exosome,損失多;步驟繁瑣;種屬特異性限制;需要磁力架和冷凍離心機等儀器

四、PEG沉淀法

聚乙二醇(PEG)可與水分子形成網狀結構,捕獲一定粒徑大小的外泌體顆粒。

優點:操作簡單;不需要大型離心機等儀器

缺點:市面上品牌眾多,大多可靠性差;發表文章易受質疑等。

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介紹了這么多種方法,那究竟哪種方法是*的提取外泌體的方法呢?以上方法都有優劣,并沒有哪一種方法就是*方法,因綜合衡量實驗要求、實驗室經費、儀器設備等諸多因素。

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我公司還有HAKATA和HyClone培養基,PBS,胰酶雙抗,SIGMA抗體等。

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