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細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲污染怎么辦?

2022-09-01 瀏覽次數(shù):1238

    “黑膠蟲"可寄生于動(dòng)物細(xì)胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,依靠細(xì)胞和培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)為生,并隨細(xì)胞傳代而傳代。可見(jiàn)“黑膠蟲"是一種異養(yǎng)生物。我們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦?下面有幾個(gè)處理建議,我們一起來(lái)了解下吧!


1.換好一點(diǎn)的血清,這樣可以有效減少“小黑點(diǎn)"的形成。一般的血清都不要去滅活處理,為什么呢?


    因?yàn)榻?jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),或*沒(méi)有任何作用,甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱滅活的血清,沉淀物的形成會(huì)顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點(diǎn)",常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又會(huì)使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。除非是在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),才推薦做熱滅活。所以在不是做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),血清盡量不經(jīng)熱滅活。


2.如果是貼壁細(xì)胞的話,可用無(wú)菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。若是懸浮的話,就不太好處理拉,可以向其中少加一點(diǎn)滋養(yǎng)細(xì)胞。加滋養(yǎng)細(xì)胞對(duì)有黑膠蟲的剛復(fù)蘇的細(xì)胞很有效!還有就是實(shí)驗(yàn)環(huán)境要注意好,保持細(xì)胞間整個(gè)環(huán)境的潔凈度。如果細(xì)胞不是非常珍貴,可以用伯氨奎、磺胺、四環(huán)素、貝尼爾,也有建議慶大霉素500ug/ml洗滌。


3.換用好的一次性塑料培養(yǎng)瓶。


4.停止復(fù)蘇,停止養(yǎng)細(xì)胞,*消毒所有用于細(xì)胞培養(yǎng)的一切用品,包括所用的培養(yǎng)瓶,培養(yǎng)基,吸管,胰酶,孵箱,超凈臺(tái)、空間等等你能想到的和細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)的所有物品。一個(gè)星期后,再?gòu)?fù)蘇污染之前凍存的細(xì)胞,注意你的白大衣衣袖污染即可。這樣你可能覺(jué)得動(dòng)作太大,但可以用一個(gè)星期的時(shí)間挽救兩個(gè)月的時(shí)間,還有其他你為了找到污染源,去除污染所耗費(fèi)的精力,和財(cái)力。


5.在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液,堅(jiān)持天天洗,傳代時(shí)加生理鹽水再離心一次,接種密度稍大一些,一段時(shí)間后,蟲子就會(huì)大大減少,對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)也不會(huì)有大的影響。


    所有東西最好重配;如果實(shí)在要搶救,重點(diǎn)突破,留幾瓶污染不是很嚴(yán)重的細(xì)胞搶救,其余棄去


6.如果有其它可用的細(xì)胞,那么污染的細(xì)胞最好扔掉;如沒(méi)有,可試著用抗生素,可靠的是細(xì)菌培養(yǎng)加藥敏,據(jù)藥敏結(jié)果選擇抗生素,當(dāng)然不能影響到細(xì)胞的狀態(tài)。


7.有材料稱minocycline具有一定的作用,可以和換液結(jié)合起來(lái)使用。


    由于黑膠蟲尚未明確鑒定出是什么生物,所以上述的處理方法不一定正確,可以供考慮采用。


8.有人為尋找到殺滅“黑膠蟲"的方法,做了一個(gè)試驗(yàn),他取有“黑膠蟲"污染的六孔板,每孔內(nèi)有2ml培養(yǎng)液,向有污染的孔內(nèi)分別加入0.5ml、1ml、2ml、3ml的新潔爾滅原液,邊加邊在倒置顯微鏡下觀察。最后他得出結(jié)論:新潔爾滅與水或培養(yǎng)基的比例為1:4時(shí)即可殺死“黑膠蟲"。但是新潔爾滅對(duì)細(xì)胞的負(fù)面影響太大,比較珍貴的細(xì)胞培養(yǎng)最好不采用此方法。


    在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中,人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的,有像細(xì)菌的、有像支原體的、有原蟲的、有真菌的,還有細(xì)胞碎片的。在國(guó)內(nèi)個(gè)實(shí)驗(yàn)室的器材條件參差不齊,而且實(shí)驗(yàn)人員的操作質(zhì)量也不盡相同,同一種現(xiàn)象也可能有些許差異,當(dāng)用描述出來(lái)的現(xiàn)象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細(xì)胞被細(xì)菌污染了,不好處理,而卻描述出來(lái)的現(xiàn)象和流傳的黑膠蟲類似,就會(huì)把培養(yǎng)失敗的原因歸結(jié)到無(wú)法處理的黒膠蟲污染,甚至可能說(shuō)它發(fā)現(xiàn)的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了,黑膠蟲就會(huì)人為的變種,什么的都有。黑膠蟲是否存在,還有待于科學(xué)的發(fā)展。但有一點(diǎn)可以肯定的,大部分人發(fā)現(xiàn)的“黒膠蟲"并不是真正那個(gè)未知的黒膠蟲,而是不很常見(jiàn)的細(xì)菌、真菌、原蟲等微生物污染。


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