細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清HAKATA，12676-029，北美源，*

★CQ★早期凋亡細(xì)胞及活細(xì)胞的胞膜正常，DNA染料碘化丙錠(PI)拒染，但可被另外一種DNA染料Hoechst342(Ho342)染色；而壞死細(xì)胞的胞膜完整性受到破壞，細(xì)胞不需固定即可被PI染色。凋亡細(xì)胞的胞膜成分亦發(fā)生改變，在凋亡早期，原來位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸(PS)遷移至脂雙層外側(cè)。另外，細(xì)胞凋亡時(shí)核酸內(nèi)切酶被激活，首先將DNA切成50～300kb大小的DNA，然后進(jìn)一步將染色質(zhì)裂解成單個(gè)核小體和寡聚核小體，形成180～200bp的DNA斷。而壞死細(xì)胞DNA斷裂無規(guī)律性。

★CQ★上海蒂科生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的高新技術(shù)企業(yè)，主營(yíng)業(yè)務(wù)：胎牛血清（HAKATA、Hylone、SERANA、NTC、Corning、BOVOGEN、PAA、SIGMA等品牌），無外泌體血清(SBI)，ELISA試劑盒（HAKATA自主品牌、進(jìn)口），細(xì)胞（400多種類通過STR鑒定），培養(yǎng)基（干粉、液體），雙抗，胰酶，sigma試劑，各種品牌進(jìn)口試劑等。公司向廣大客戶提供產(chǎn)品的同時(shí)，始終將客戶服務(wù)和放在比產(chǎn)品銷售更重要的位置上，公司聘請(qǐng)了專業(yè)技術(shù)人員，為客戶提供專業(yè)性、個(gè)性化的技術(shù)服務(wù)。公司秉承“誠(chéng)實(shí)做人，誠(chéng)信做事”的理念，把zui的產(chǎn)品和zui貼心的的服務(wù)奉獻(xiàn)給新老客戶。

上海蒂科生物綜述了細(xì)胞凋亡的生物化學(xué)檢測(cè)三種方法。

細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清HAKATA，12676-029，北美源，*

一、ISOL檢測(cè)法

原理：與TUNEL凋亡檢測(cè)法類似，ISOL（In Situ Oligo Ligation，原位寡核苷酸片段連接）也是通過末端標(biāo)記斷裂DNA的方法。但該方法的創(chuàng)新在于利用ISOL方法，在DNA段的平端或3’端單個(gè)突出堿基進(jìn)行連接擴(kuò)增，鑒于只有發(fā)生凋亡的細(xì)胞才會(huì)發(fā)生平端或3’端單個(gè)堿基突出，所以ApopTag 過氧化物酶ISOL凋亡檢測(cè)試劑盒能夠明確的區(qū)分凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞。

優(yōu)勢(shì)：原位特異標(biāo)記，能夠zui大限度的降低背景，克服TUNEL法檢測(cè)的假陽性，適用于石蠟包埋的組織、冰凍組織、貼壁細(xì)胞以及懸浮細(xì)胞的凋亡檢測(cè)。

細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清HAKATA，12676-029，北美源，*

二、DNA凝膠電泳(DNAladder)

凋亡過程中DNA裂解是標(biāo)志細(xì)胞zui終走向死亡的不可逆的重要過程，DNA凝膠電泳也曾被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡判定的金標(biāo)準(zhǔn)之一。抽提細(xì)胞的DNA,確定樣品中DNA的量和純度，然后在瓊脂糖凝膠上電泳。正常活細(xì)胞的DNA凝膠電泳為一條區(qū)帶;細(xì)胞凋亡時(shí)，由于DNA被裂解成單個(gè)核小體和寡聚核小體，電泳時(shí)呈現(xiàn)特征性的“階梯狀”(ladder)條帶，壞死細(xì)胞的DNA是被隨機(jī)破壞的，不能形成階梯狀條帶，電泳時(shí)出現(xiàn)類似血涂片的連續(xù)性改變。此方法是判斷細(xì)胞有無凋亡發(fā)生的一種簡(jiǎn)便方法，比較適用于體外培養(yǎng)的非增殖性細(xì)胞的檢測(cè)。

缺點(diǎn)：

(1)特異性較差，特征性的180～200bpDNA梯帶的出現(xiàn)并非凋亡所*，另外在某些罕見的情況下細(xì)胞發(fā)生凋亡可無DNA斷裂。

(2)不能提供單個(gè)細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞的組織學(xué)定位或細(xì)胞分化等凋亡信息。

(3)不能進(jìn)行準(zhǔn)確定量，只能進(jìn)行半定量。

(4)靈敏性較差，要求所測(cè)標(biāo)本細(xì)胞數(shù)在1×106以上才能使電泳清晰。

(5)適用于只含有單一細(xì)胞成分標(biāo)本的測(cè)定，對(duì)組織細(xì)胞組成復(fù)雜者，不能確定凋亡發(fā)生于哪類細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清HAKATA，12676-029，北美源，*

三、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）核小體測(cè)定

ELISA是定量檢測(cè)細(xì)胞凋亡的免疫化學(xué)法，其基本原理是利用夾心ELISA方法檢測(cè)細(xì)胞凋亡后形成的由組蛋白及DNA斷組成的核小體。在微定量板上吸附抗組蛋白抗體，加入細(xì)胞裂解后離心所得的含有核小體的上清液，核小體上的組蛋白與包被的抗組蛋白抗體結(jié)合；加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體，與核小體上的DNA結(jié)合；加酶的底物，測(cè)光吸收值。此方法敏感性高，所需細(xì)胞數(shù)少，可檢測(cè)低至5×10²/mL的凋亡細(xì)胞。此外，此方法不需特殊儀器，比較適合基層工作。

缺點(diǎn)：

(1)不能測(cè)定凋亡發(fā)生的量。

(2)適合單一成分細(xì)胞的檢測(cè)，對(duì)于多細(xì)胞成分的組織或細(xì)胞混合物，不能判定凋亡發(fā)生在哪種細(xì)胞。

(3)不能提供單個(gè)細(xì)胞或相關(guān)細(xì)胞的組織學(xué)定位。

★CQ★上海蒂科生物為您提供實(shí)驗(yàn)所需的胎牛血清：

品牌1 德國(guó)SERANA

產(chǎn)品名稱       貨號(hào)    來源       規(guī)格

胎牛血清FBS S-FBS-SA-015 SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS S-FBS-US-015 USA 500ML

超低IgG FBS S-FBS-SA-055 SOUTH AMERICA 500ML

透析 FBS S-FBS-US-065 USA 500ML

活性炭/葡聚糖處理FBS S-FBS-AU-045 AUSTRALIA 500ML

正常人AB血清 S-HU-US-011 USA 100ML

品牌2 澳洲BOVOGEN

胎牛血清FBS SFBS SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS SFBS New Zealand 新西蘭 500ML

新生牛血清  SNCS New Zealand 500ML

品牌3 美國(guó)HAKATA

胎牛血清FBS 10270-106 SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS c2027050 SOUTH AMERICA 500ML

優(yōu)等胎牛血清FBS 10091-148 新西蘭 500ML

優(yōu)等胎牛血清FBS 10437-028 Mexico 500ML

優(yōu)等胎牛血清FBS 10099-141 AUSTRALIA 500ML

優(yōu)等胎牛血清FBS 10099-133 AUSTRALIA 100ML

特級(jí)胎牛血清FBS 16000-044 USA 500ML

熱滅活 FBS 10082-147 USA 500ML

熱滅活FBS   10100-147 AUSTRALIA 500ML

超低IgG FBS 16250-078 USA 500ML

透析胎牛血清 FBS 264000-044 USA 500ML

活性炭/葡聚糖FBS   12676-029 USA 500Ml

馬血清  16050-122 New Zealand  500ML

熱滅活馬血清 26050-088 New Zealand 500Ml

品牌4 美國(guó)Hylone

胎牛血清FBS Sv30087.02 SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS SV30160.03 SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS SH30071.03 USA  500ML

優(yōu)等胎牛血清FBS SH30084.03 AUSTRALIA 500ML

特級(jí)胎牛血清FBS SH30070.03 USA 500ML

特級(jí)胎牛血清FBS SH30070.03E USA 500ML

標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清FBS SH30370.03 AUSTRALIA 500ML

活性炭/葡聚糖處理 SH30068.03 USA 500ML

透析胎牛血清 SH30079.03 USA 500ML

品牌5 PAA

胎牛血清FBS A15-101 EU 500ML

胎牛血清FBS A15-151 EU 500ML

品牌6 以色列BI

胎牛血清FBS 04-001-1ACS SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS 04-002-1A ES胎牛血清 500ML

品牌7 美國(guó)SIGMA

胎牛血清FBS F2442 USA 500ML

品牌8 美國(guó)GEMINI

胎牛血清FBS 900-108 SOUTH AMERICA 500ML

胎牛血清FBS 100-700 AUSTRALIA 500ML

胎牛血清FBS 100-500 USA 500ML

科研用人AB血清 100-512 100ML

細(xì)胞培養(yǎng)胎牛血清HAKATA，12676-029，北美源，*

★ CQ ★我們公司還有一些熱銷產(chǎn)品：

產(chǎn)品名稱        貨號(hào)  規(guī)格

HAKATA 雙抗 15140-122 100ML

HAKATA 胰酶 25200-056 100ml

HAKATA 胰酶 25200-072 500ml

Hylone 雙抗 SV30010 100ML

Hylone 胰酶 SH30042.01 100ML

HAKATA B-27™ 17504-044 10ML

HAKATA B-27™ 12587-010 10ML

Invitrogen TRIzol™ Reagent 15596-026 100ML

SIGMA  DSMO D2650 100ML

BD 基質(zhì)膠 354234 10ml

BD 基質(zhì)膠 356234 5ml

Lipo2000 11668-019 1.5ml

Lipo2000 11668-027 0.75

Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent  L3000-008 0.75ml

Lipofectamine™ 3001 Transfection Reagent  L3000-015 1.5ml

瓊脂糖 西班牙原裝 100g

1640培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：31800-022 10X1L原裝

DMEM(高糖）含丙酮酸鈉 HAKATA貨號(hào)：12800017 10X1L原裝

DMEM(高糖) 不含丙酮酸鈉 HAKATA貨號(hào)：12100046 10X1L原裝

DMEM(低糖） HAKATA貨號(hào)：31600034 10X1L原裝

MEM 培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：41500034 10X1L原裝

M199培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：31100035 10X1L原裝

F12培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：21700075 10X1L原裝

D-MEM/F-12培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：12400-024 10X1L原裝

IMDM培養(yǎng)基 HAKATA貨號(hào)：12200-036 10X1L原裝

蛋白酶K MercK   1245680100 100mg

G418 Life Invitrogen 11811-031 5g

M-MLV Promage 10000u

胰蛋白胨 OXOID  LP0042 500g

酵母粉 OXOID  LP0021 500g

潮霉素B Roche   10843555001 20ml

G418 遺傳霉素 Life Invitrogen 11811023 1g