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    EC-GI-10細胞,EFE-184細胞,

    2017-03-24 瀏覽次數:1495

    比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),就以coloncancer為例,比如HCT15,LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次zui多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。

    5,常規的細胞實驗(增殖,凋亡,遷移,分化之類的),受消化影響不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化(難消化細胞例外)即可。但少數實驗,比如病毒包裝,對細胞代數,對細胞狀態要求*。這個時候,胰酶消化,就是潤洗,都會對細胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數一多,細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性,來使得細胞脫離基質附著表面,但不切割任何蛋白。

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