| 名稱 | MET-5A細胞人膜間皮細胞 |
| 型號 | MET-5A細胞 |
| 報價 |  |
| 特點 | MET-5A細胞人膜間皮細胞1） 來源：蒂科生物細胞庫2） 形態(tài)：貼壁上皮細胞樣 3） 含量：>1x106 個/mL4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝6） 運輸：順豐發(fā)貨} |
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地址：上海市嘉定區(qū)翔江公路518弄D座2樓
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- 詳細內容
MET-5A細胞人膜間皮細胞
1） 來源：蒂科生物細胞庫
2） 形態(tài)：貼壁 上皮細胞樣
3） 含量：>1x106 個/mL
4） 污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
6） 運輸：順豐發(fā)貨
培養(yǎng)條件：
培養(yǎng)基：m199+10%FBS+EGF+insulin（推薦HAKATA貨號:HN-FBS-500）
溫度：37℃ 氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代：
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進行傳代，傳代比例為1:2到1:4；
3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預熱好的胰酶，置于37°孵育消化（diyi次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為zuijia消化時間，記錄zuijia消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入*培養(yǎng)基重懸細胞，進行傳代。
凍存：
建議使用本公司無血清細胞凍存液貨號：H-W-100，用4度保存的冷凍液直接重懸細胞，不能預熱后使用。
保存條件：液氮存儲
溫馨提示：（常見問題，處理方式）
T25瓶為例；
1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：diyi次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
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