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    A549/DDP細胞-A549/DDP耐藥株

    2017-04-12 瀏覽次數:1701

    A549/DDP細胞-A549/DDP耐藥株細菌破壁方法:細菌破壁是成功提取DNA的關鍵步驟之一。革蘭氏陽性菌的肽聚糖層構成堅韌的三維立體結構,而陰性菌肽聚糖層構成疏松的二維結構,因此不同種類細菌的破壁方法不同。目前破壁方法有十二烷基磺酸鈉(SDS)裂解法、溶菌酶法、反復凍融法、研磨法、超聲波法等。不同細菌對溶解劑有不同的抗性,溶解細菌前需先取少量菌懸液,加一定濃度的溶解劑,看是否能溶解菌體。若SDS和溶菌酶均能溶解菌體,使用既廉價又能抑制DNase的SDS;若需用溶菌酶應加入SDS促進溶菌;如果60℃溶菌過程緩慢,可將溫度提高到70~75℃;A549/DDP細胞-A549/DDP耐藥株有些菌也可用脫氧膽酸鹽破裂細胞膜溶解菌體。對溶解劑有抗性的菌類,可在含青霉素或甘氨酸的培養基中培養,使其不形成細胞壁。如SDS和酶破壁效果不理想,可同時用反復凍融、超聲波或氧化鋁和玻璃粉研磨輔助破壁。

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